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培養(yǎng)小鼠骨髓內皮祖細胞的三種常用消化酶

更新時間:2022-09-09點擊次數:1805
  在科研實驗中一般用到的現(xiàn)成細胞系/株,我們只需要進行細胞傳代和保種。然而,這些細胞系常常由于體外長期培養(yǎng),而丟失原有生物學特性,對藥物處理的反應差距越來越大。
  
  小鼠骨髓內皮祖細胞直接從機體取出的細胞或從組織獲得的單個細胞,并可以在體外進行培養(yǎng)。這里的組織主要指:器官、外周血及胚胎等。
  
  小鼠骨髓內皮祖細胞離體時間短,更接近于生物體內的生活狀態(tài),且生物性狀尚未發(fā)生很大改變。因此在藥物篩選、細胞移植、類器官培養(yǎng)、腫瘤研究等眾多領域備受歡迎。
  
  但組織消化過程中常遇到多種問題,例如消化不*、細胞死亡率高等。如何克服這些問題,消化酶的選擇是關鍵。本文將為您介紹一些常用的消化酶及其適用組織,供您參考。
  
  1、Trypsin(胰酶)
  
  從牛和人的胰腺中得到的粗提物;通過作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽腱,除去細胞間粘蛋白及糖蛋白,影響細胞骨架,從而使細胞分離。
  
  胰蛋白酶適用于消化細胞間質較少的軟組織,如胚胎、上皮、肝、腎等組織。但對于纖維組織和較硬的癌組織的效果差,常常將胰蛋白酶與其他消化酶聯(lián)合使用。
  
  2、Collagenase(膠原酶)
  
  酶法組織消化中常用的膠原酶,能特異性地降解胞外膠原蛋白,使膠原蛋白和纖維粘連蛋白的網狀結構解離,而不損壞細胞表面結構的完整性。
  
  由于細胞外基質的成分復雜,除膠原蛋白外,還含有彈性蛋白,糖蛋白等其他大分子結構。而且不同組織類型,不同物種來源,不同年齡的組織中胞外基質組份不同。
  
  所以商業(yè)化的膠原酶產品一般是梭狀芽孢桿菌裂解液的粗提物,是膠原酶、胰蛋白酶等蛋白水解酶混合物,能降解膠原蛋白和其他蛋白,及多糖等胞外大分子物質,適用于多種組織的消化應用。
  
  3、Dispase(分散酶)
  
  Dispase是一種純化的中性蛋白酶,用于小鼠骨髓內皮祖細胞的制備,由于其溫和的特性,細胞外基質的消化,不損傷細胞膜,在消化過程中對細胞造成的損傷極小,它還能用于細胞的次代培養(yǎng),也可用于細胞懸液中的聚團消化解聚。
  
  提取自多黏芽孢桿菌,杜絕了支原體污染的可能性,在寬泛的pH和溫度條件下具有良好的穩(wěn)定性,因此在組織消化過程中的表現(xiàn)比膠原酶更加穩(wěn)定。
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