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大鼠軟骨細(xì)胞制備時(shí)需使用哪些試劑?

更新時(shí)間:2022-07-11點(diǎn)擊次數(shù):1339
  大鼠軟骨細(xì)胞分離自正常大鼠軟骨組織,軟骨細(xì)胞主要功能:軟骨是人身體中不會(huì)發(fā)生的組織;骨骼在發(fā)育初期大部分是由軟骨構(gòu)成的;軟骨一般起到承重負(fù)荷,減少關(guān)節(jié)間骨骼摩擦等作用。
  
  前面我們講述過(guò)軟骨細(xì)胞的制備方法,但是在制備過(guò)程所使用的試劑有哪些,這你們知道嗎?我相信很多人都是不知道的。下面,欣潤(rùn)生物就來(lái)詳細(xì)講述一二。
  
  大鼠軟骨細(xì)胞制備過(guò)程中主要的試劑:
  
  1、PBS:每袋加ddH2O定容至1000ml,調(diào)pH7.2,高壓滅菌消毒。
  
  2、DMEM細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)液:臨用前根據(jù)需要加10%胎牛血清,1%的ITS,按1%體積分?jǐn)?shù)加入雙抗貯存液(青霉素+鏈霉素),使青霉素和鏈霉素的終濃度分別為100U/mL和100U/mL,置于4℃冰箱保存。
  
  3、抗生素:青霉素(80萬(wàn)U)和鏈霉素(100萬(wàn)U)在無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)以高壓滅菌過(guò)的雙蒸水溶解(分別加入4ml滅菌水/青霉素,5ml滅菌水/鏈霉素),配制成20萬(wàn)u/ml分裝,置于-20℃冰箱保存,臨用時(shí)4℃解凍。
  
  注意:盡量避免反復(fù)凍融,并使培養(yǎng)基濃度為100u/ml。
  
  4、細(xì)胞凍存液:生長(zhǎng)培養(yǎng)基(含20%胎牛血清)或100%胎牛血清,加入10%的DMSO混合均勻,置于4℃冰箱保存。
  
  注意:大鼠軟骨細(xì)胞接種后48H再換液,這樣細(xì)胞才帖牢不掉。第三、四天多觀察,細(xì)胞在會(huì)爆發(fā)式增殖。
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